标题:根据它们的分子大小排阻或凝胶过滤层析

信息分类:站内新闻   作者:yiyi发布   时间:2016-10-2 13:51:38 将本页加入收藏

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正文:

根据它们的分子大小排阻或凝胶过滤层析


     分子排阻或凝胶过滤层析

  分子排阻法分离蛋白质是根据它们的分子大小来分离的。这种方法
的原理是使液体流过带孔的珠子来分离蛋白质。这些小孔有固定的大小
,是由共价的聚合体交联形成的。在不同分子质量的蛋白质混合物里有
一些小到可以通过小孔,因此它们流过柱子的速度较慢。大一些的蛋白
质很少可以进入小孔,它们通过树脂的过程不受阻碍。非常大的蛋白质
通过“孔隙体积”被洗脱,并且不和小孔有相互作用的所有蛋白质都可
通过“孔隙体积”被洗脱,这个与蛋白质的分子大小无关。流过柱子的
速度反应了与小孔相互作用的程度;小的蛋白质花费大量时间在小孔内
的溶剂体积里,洗脱速度远慢于只与珠子边缘发生作用的蛋白质。很明
显这个过程为分离不同大小的蛋白质提供了有效的方法。

  理想的情况下洗脱体积与分子质量的对数存在线性关系。这意味着
如果一个分子排阻柱子由已知分子质量的蛋白质校准后,分子质量未知
的蛋白质可以通过洗脱位置来推测它的分子质量。如果未知分子质量的
蛋白质和标准蛋白的形状相似,那么可以对蛋白质分子质量进行比较精
确的推测,这是因为分子排阻层析的过程对溶液中蛋白质占有的平均体
积比较敏感。这个体积通常用蛋白质的斯托克斯半径表示,这个常量受
蛋白质总体形状影响很大。因此,长蛋白如纤维蛋白质呈现不规则的移
动速度。对分子排阻层析的严格定义应该是根据不同的流体动力学半径
来分离蛋白质。现在分子排阻层析很少用来分析亚基分子质量而用来去
除蛋白质中的杂物。通常用来去除蛋白质样品中的盐或把蛋白质从一种
缓冲液换到另一种缓冲液中。










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